光片顯微鏡怎樣獲取數據和調整樣品的方向？

　　光片顯微鏡的使用體驗可能感覺與傳統顯微鏡特別不同，因為大多數設置都是*數字化的，沒有目鏡，所以無法通過眼睛快速檢查樣品的位置和方向。此外，位移臺的控制可能與傳統顯微鏡的界面也有很大不同?？焖賿呙铇悠氛麄€深度的能力，無需像共聚焦顯微鏡那樣等待掃描完成，使得光片顯微鏡的工作流程快速且直接。同樣，快速的數據獲取速度使得實驗能夠快速連續地進行。然而，快速的數據獲取會導致大量數據迅速積累，用戶需在謹慎考慮數據存儲與數據處理能力的情況下方可進行長時間拍攝。

 

　　在普通的寬場熒光顯微鏡中，安裝好的樣品被放置在顯微鏡臺上，然后從上面或下面（垂直或倒置）進行照明和檢測。光片顯微鏡由于可以擁有不同的照明路徑，給樣品的放置增加了另一個自由度，從而允許用戶準確定位樣品。此外，多組數據可以從不同的路徑獲得，并拼合在一起，也能使顯微鏡的穿透深度固定的情況下獲得更大的成像范圍。同時，在光片顯微鏡中，樣品的放置方向也比經典的單透鏡顯微鏡更為重要。用戶需要使樣品相對于照明軸和檢測軸方向正確：光片需要在不通過樣品的高折射或高吸收結構的情況下到達感興趣的區域。

 

　　與傳統熒光顯微技術不同的是，圖像采集過程中的第一個關鍵步驟是光片的校準。在光片顯微鏡中，我們需要辨別調整光片的基本參數，即高度和厚度，以及正確地將光片定位在檢測透鏡的焦平面上。這三個步驟對于獲得光片好的層析能力以及可靠性、一致性高的結果都是不可少的。此外，光片的校準和對其參數的了解可能是決定進一步實驗策略的關鍵性先決條件，例如調整軸向的步進和之后的分析步驟。