數字PCR儀是一種新的絕對定量PCR,主要是對PCR反應物進行有限稀釋,隨后在不同的反應腔室里進行PCR擴增,最后根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例得出靶分子的起始拷貝數或濃度的技術。 數字PCR儀技術特點:
1、絕對定量,不依賴Ct值,無需標準曲線;
2、超高靈敏度,適用于稀有序列及稀有突變的檢測;
3、精準的定量結果和好的重復性;
4、適用復雜樣品檢測,不易受PCR抑制物影響。
核心優勢:
1、高靈敏度——數字PCR的靈敏度與同體積反應體系的分割份數成正比;
2、分辨率——低至0.1倍基因表達差異;
3、絕對定量——根據每個微滴所含平均拷貝數以及泊松分布進行計算,從而得出檢測樣本的絕對拷貝數,同時無需依賴標準曲線。
數字PCR儀適用范圍:
1.檢測下限低至單拷貝,可應用于:
致病微生物檢測/病毒載量鑒定(HIV、MRSA、CT-DNA等)
環境樣本檢測(水、空氣樣本等)
microRNA檢測
單細胞基因表達分析
生物制品宿主DNA殘留檢測
2.可在復雜樣品中檢測特定靶標序列,可應用于:
癌癥標志物檢測(KRAS/BRAF/HER2/EGFR)
基因組變異檢測(SNP/SNV)
線粒體突變檢測
3.數字PCR儀可得到更精確的定量結果,可應用于:
病毒載量鑒定(制藥、臨床藥效評估及愈后監控)
CRMCs標定分子標準品和對照品的生成
CNV(拷貝數變異)分析鑒定
NGS測序文庫的絕對定量
差異基因表達分析